血清的存在會影響脂質(zhì)體的形成,建議配制核酸轉(zhuǎn)染試劑復合物時采用無血清培養(yǎng)基(一般推薦MEM 培養(yǎng)基)。
轉(zhuǎn)染試劑能否凍存?
不能。本試劑一定要4 ℃保存,要注意避免反復多次長時間開蓋,長時間開蓋會導致脂質(zhì)體氧化而影響轉(zhuǎn)染效率。
使用脂質(zhì)體核酸轉(zhuǎn)染試劑需要注意什么?
1)細胞鋪板密度較高,以90%-95%為佳;
2)使用高純度的DNA有助于獲得較高的轉(zhuǎn)染效率;
3)制備轉(zhuǎn)染復合物時要求用無血清培養(yǎng)基稀釋DNA和轉(zhuǎn)染試劑;
4)轉(zhuǎn)染的時候培養(yǎng)基中不能添加抗生素;
5)試劑應該在4度保存,要注意避免多次反復長時間開蓋;
6)初次使用應優(yōu)化DNA濃度和陽離子脂質(zhì)體試劑量以得到最大的轉(zhuǎn)染效率。DNA 和轉(zhuǎn)染試劑的比例,通常推薦是1:2-1:3。
不需要。脂質(zhì)體復合物可以穩(wěn)定存在6個小時。如果在進行轉(zhuǎn)染前沒有進行細胞換液,為了保證細胞正常生長所需的營養(yǎng),需要在4~6小時后換用新的培養(yǎng)基。但如果轉(zhuǎn)染之前已進行過換液則在脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染后不需要進行再次換液。
若想提高轉(zhuǎn)染效率,應該注意什么?
1)轉(zhuǎn)染時細胞的密度,90%-95%。
2)轉(zhuǎn)染時,核酸和脂質(zhì)體稀釋液要用MEM無血清培養(yǎng)基。
3)轉(zhuǎn)染后4-6h可選擇換液。
可否進行DNA和siRNA的共轉(zhuǎn)染?效果如何?
DNA和siRNA的共轉(zhuǎn)染時候,siRNA轉(zhuǎn)染效率差。
轉(zhuǎn)染試劑可否進行慢病毒包裝的轉(zhuǎn)染呢?
慢病毒包裝是可以的,但是在進行慢病毒包裝的效率不一定和轉(zhuǎn)染的效率有關,同時還跟包裝質(zhì)粒的選擇和質(zhì)粒間的比例有關系。
產(chǎn)品推薦
貨號 | 名稱 | 規(guī)格 | 價格 |
78PEI25000 | 線性聚乙烯亞胺PEI MW25000 | 100mg/1g/5g | 700/3000/11000 |
78PEI40000 | 線性聚乙烯亞胺PEI MW40000 | 100mg/1g/5g | 700/3000/12000 |
78EF10001 | Lipofectamine 6G | 0.75ml/1.5ml/15ml | 2000/3000/18000 |
78EF10003-1L | BIOHUB Polyethyleneimine PEI Pro (GMP) | 5ml/1L | 7000/100000 |