簡要描述:脫脂奶粉,脂肪含量低,蛋白含量高。配制成0.3~5%的水溶液使用。
詳細介紹
品牌 | BIOHUB | 供貨周期 | 現(xiàn)貨 |
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主要用途 | 作為抗體反應等的印跡封閉溶液使用 | 應用領域 | 生物產業(yè),制藥 |
western blot中脫脂奶粉的作用
封閉
原理:用非抗原的蛋白去封閉膜的蛋白質結合位點,避免標記抗體固定在膜上引起背景增高,常用的封閉液有BSA,脫脂奶粉,明膠, tween-20等,一般脫脂奶粉。
實驗步驟:
5%脫脂奶粉(用1x TBS配制,或1xTBST配制)封閉一晚上 或室溫1~2小時
當一抗為抗磷酸化抗體時,脫脂奶粉由于含有較多磷酸化蛋白,請改為使用BSA。
2,一抗、二抗孵育
原理: 一抗可以與要檢測的蛋白特異結合,二抗可與一抗結合,同時二抗上帶有特異的酶(如辣根過氧化物酶HRP,堿性磷酸酶法AP等 ),標記酶可以分解化學顯色底物產生有顏色的條帶或催化化學發(fā)光底物使膠片感光。
實驗步驟:
一抗孵育:5%脫脂奶粉稀釋一抗到合適的濃度,與膜室溫孵育1小時或4度一晚上(抗體濃度及孵育時間需根據不同的抗體做相應調整, 1xTBST,洗膜3次,每次5分鐘。
二抗孵育:5%脫脂奶粉稀釋二抗到合適的濃度,與膜室溫孵育1小時, 1x TBST,洗膜3次,每次5分鐘。
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